9028-76-6胆固醇氧化酶 |检测方法|中间体|工艺|杂质|图谱|质量标准 鼎信通药业-丁亮
2024-04-24
产品详情
- Cas：9028-76-6
- 价格：300
- 产品名称9028-76-6胆固醇氧化酶 |检测方法|中间体|工艺|杂质|图谱|质量标准 鼎信通药业-丁亮
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- 简介
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技术指标
外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度: ≥90%; 比活性:≥8 U/mg 酶粉;过氧化氢酶:≤0.001%; 胆固醇酯酶:≤0.01%; 葡萄糖氧化酶:≤0.01%; ATP酶: ≤0.005%
酶学性质
来源:微生物;分类:EC 1.1.3.6; 分子量:60 kDa(SDS-PAGE); 等电点:5.6; Km值:3.3×10-4 M(Cholesterol); 抑制剂:SDS,Ag+,Zn2+,Hg2+; 最适pH: 7.0;最适温度: 50℃; pH稳定性: 5.5-10(25℃,16 h); 热稳定性: 40℃ 以下稳定(pH 7.0,30 min);稳定性: -25~-15℃ 静置保存 12 个月保持90% 以上活性;保护剂: BSA 以及非离子型表面活性剂.
酶活定义
单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成 1μmol H2O2 所需的酶量。
试剂准备
试剂I:0.1 M磷酸钾缓冲液,pH 6.5。
试剂II:在500ml烧杯中加入5 mL Triton
X-100 和 0.5 g 胆固醇,用保鲜膜密封,用微波炉加热至胆固醇完全溶解。缓慢加入 90 mL 双蒸水,加热并使其沸腾 30-60s,溶液将变浑浊。用自来水淋洗使溶液冷却,冷却后的溶液会变澄清,若冷却后未变澄清则需要重新加热使其完全溶解。在澄清的溶液中加入 0.4 g 胆酸钠,用双蒸水定容至100 mL。定容后用 0.22um 滤膜过滤,此溶液在室温下一周内稳定。如果该溶液变浑浊,可轻微加热使其澄清。试剂III:纯水配制 100 U/mL POD。
试剂IV:50 mM 4-AA 溶液(1.016 g 4-AA溶于100 mL UP水)。
试剂V:50 mM TOOS 溶液(1.477 g TOOS溶于100 mL UP水)。
酶稀释液:20 mM 磷酸钾缓冲液,pH 7.0,含0.2%BSA。
样品:用酶稀释液将酶稀释至 0.05-0.2U/mL。
按如下配制反应混合物:
试剂I: 53 mL; 试剂II:7 mL; 试剂III:5 mL; 试剂IV:3 mL; 试剂V:3 mL; 双蒸水:19 mL; 共90 mL,可用于100次反应
操作步骤
1. 将反应混合物置于 37℃ 水浴锅预热;
2. 向1 mL比色皿中加入 0.9 mL 反应混合物。
3. 向反应混合物中加入 0.1 mL 待测酶液,混匀。
4. 37℃反应,用分光光度计在 555 nm 检测样品1 min内的吸光度变化(ΔAs)
*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb
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