果糖基肽氧化酶 |检测方法|中间体|工艺|杂质|图谱|质量标准 鼎信通药业-丁亮
2024-04-24
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- 价格：300
- 产品名称果糖基肽氧化酶 |检测方法|中间体|工艺|杂质|图谱|质量标准 鼎信通药业-丁亮
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- 简介
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技术指标
外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%(SDS-PAGE);比活性:≥4 U/mg酶粉;过氧化氢酶:≤0.01%;ATP酶:≤0.005%;葡萄糖氧化酶:≤0.03%;胆固醇氧化酶:≤0.003%
酶学性质
来源:微生物;分类:EC 1.5.3;分子量:60 kDa(SDS-PAGE);等电点:6.4;Km值:4.0×10-3 M(fructosyl-Val-His);抑制剂:Hg2+,Pb2+;最适pH:6.5-7.5;最适温度:37℃;pH稳定性:pH 6.5-9.5(25℃,16 h);热稳定性:40℃以下稳定(pH 8.0,30 min);稳定性:-25~-15℃静置保存12个月保持90%以上活性;保护剂:甘油、海藻糖;
用途:氧化糖化氨基酸,用于酶法试剂的研发和大量配制。
酶活定义
单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成1μmol H2O2所需的酶量。
试剂准备
试剂I:0.1 M磷酸钾缓冲液,pH 8.0。
试剂II:1 kU/mL POD。
试剂III:50 mM TOOS溶液(1.477 g TOOS溶于100 mL UP水)。
试剂IV:50 mM 4-AA溶液(1.016 g 4-AA溶于100 mL UP水)。
试剂V:200 mM糖化缬氨酸。
按如下配制反应混合物:
试剂I:10 mL;试剂II:0.1 mL;试剂III:1 mL;试剂IV:1 mL;试剂V:10 mL;双蒸水定容至100mL
样品:用酶稀释液20 mM Tris-HCl,pH 8.0稀释。
操作步骤
1.向1 mL比色皿中加入980μL反应混合物。
2.37℃孵育5 min。
3.向反应混合物中加入20μL待测酶液。
4.37℃反应,用分光光度计在555 nm检测样品1 min内的吸光度变化(ΔAs)。
*用酶稀释液代替待测酶液,测定样品1 min内的吸光度变化(ΔAb)。ΔA=ΔAs-ΔAb
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